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    嘔吐毒素(Don) 【名稱】嘔吐毒素(Don)
    【英文名稱】Deoxynivalenol
    【品牌】美國AFFINITECH
    【貨號】DON-0100
    【規格】96*1/盒

    實驗原理

    脫氧雪腐鐮刀烯醇(DON)是一種固相直接競爭酶聯免疫分析法。將脫氧雪腐鐮刀烯醇特異性抗體包被在聚苯乙烯微孔中。用蒸餾水或去離子水從研磨樣品中提取毒素。提取的樣品與辣根過氧化酶標記的DON混合,加入到抗體包被的微孔中。提取物中的DON與酶標記的DON競爭性的結合微孔中包被的抗體。通過洗滌棄去微孔中沒有特異性反應的內容物。加入酶底物進行染色(藍色),顏色的深淺與酶結合物的量呈正比,與樣品中或標準物中的DON的濃度呈反比。因此,隨著樣品或標準物中的DON濃度的增加,藍色越淺。加入終止液后,顏色由藍色變成黃色。在酶標儀的450nm處測定吸光度值。將樣品的OD值與試劑盒中的標準品的OD值相比,然后判讀樣品結果。

    使用目的

    脫氧雪腐鐮刀烯醇(DON)實驗是競爭性酶聯免疫反應,用于定量檢測谷類或其他動物飼料產品中的脫氧雪腐鐮刀烯醇。

    樣品的準備

    注意:必須根據建立的采樣方法采集樣品

    1.   將樣品磨碎至能夠即溶的顆粒(95%的能夠通過20目的網篩)

    2.   秤取20g磨碎的樣品,加入100ml的蒸餾水或去離子水,樣品稀釋度為1:5(w/v)。

    3.   在密閉的容器或攪拌機中震蕩混合至少3分鐘。

    4.   待顆粒沉降后將5-10ml的提取物用Whatman1號濾紙過濾,收集濾液待測。

    5.   將1ml的樣品提取物與9ml的洗液混合,將樣品按1:10的比例稀釋

    6.   樣品最終按1:50的比例稀釋后待用。

    7.   標準品使用前不需稀釋。

    實驗步驟

    注意:建議采用多道的移液器進行實驗。如果使用單道的移液器,建議樣品和標準品總共不超過16個(2條)

    1. 使用前所有的試劑恢復至室溫。用蒸餾水輕輕將PBS-Tween的小包內容物沖入0.5升的容器內,用蒸餾水配成0.5升,不使用時放入冰箱保存。

    2.   每個標準品和樣品用1個稀釋孔,放置在微孔架上。放置相同數量的抗體包被的微孔在微孔架上

    3.   每個稀釋孔中加入200μl的酶結合物。

    4.   向稀釋孔中加入100μl的標準品和樣品,每孔換新槍頭。用移液器反復吹打至少3次,使內容物混勻。

    注意:在實驗過程中實驗員必須標記每個標準品和樣品的位置。

    5.   吸取稀釋孔中100μl的內容物加入到與之對應的抗體包被微孔中,每孔換新槍頭。室溫下孵育15分鐘。如果有需要,稀釋孔內有足夠的液體,用于標準品或樣品的重復檢測。

    6.   將內容物倒入廢液瓶中,每個微孔加滿PBS-吐溫溶液,清洗微孔,然后將微孔中的水倒入廢液瓶中。反復清洗5次。

    7.   將微孔口朝下在吸水紙上拍打,去除剩余的水。

    8.   在每孔中加入2滴(或100μl)的TMB底物。室溫下避光孵育5分鐘。

    9.   每個微孔中連續加入2滴(或100μl)的終止液。按照與加入底物相同的順序相同的位置,加入終止液。

    10. 利用酶標儀,在450nm處測定并記錄每個微孔的吸光度值(OD)。

    結果判讀

    利用原始的OD值或相對于0ppm嘔吐毒素標準品的OD值的百分比建立劑量-反應曲線。利用標準曲線計算待測值。